用于递送治疗剂的脂质和组合物
2020-01-15

用于递送治疗剂的脂质和组合物

本发明提供了有利地用于将治疗剂体内递送至细胞的脂质颗粒的脂质。具体地,本发明提供了具有结构(I)的脂质, 其中R 1 和R 2 在每一次出现时各自独立地为任选取代的C 10 -C 30 烷基、任选取代的C 10 -C 30 烯基、任选取代的C 10 -C 30 炔基、任选取代的C 10 -C 30 酰基或-连接体-配体;R 3 为氢、任选取代的C 1 -C 10 烷基、任选取代的C 2 -C 10 烯基、任选取代的C 2 -C 10 炔基、烷基杂环、烷基磷酸酯、烷基硫代磷酸酯、烷基二硫代磷酸酯、烷基膦酸酯、烷基胺、羟烷基、ω-氨烷基、ω-(取代的)氨烷基、ω-磷酸烷基、ω-硫代磷酸烷基、任选取代的聚乙二醇(PEG、mw?100-40K)、任选取代的mPEG(mw?120-40K)、杂芳基、杂环或连接体-配体;以及E为C(O)O或OC(O)。

E为C(0)0或0C(0);

4.2,2-二亚油基-4-(3-二甲氨基丙基)-_二噁烷(01^11-1(6八-〇3-0嫩)的合成

对寡核苷酸的修饰还可包括将一个或多个阳离子基团至磷酸酯或修饰的磷酸酯主链部分的糖、碱基和/或磷原子的连接。可将阳离子基团连接至能够在天然、稀有或通用的碱基上取代的任意原子。优选的位置是不干扰杂交,即不干扰碱基配对所需的氢键合相互作用的位置。可以,例如通过糖的C2'位置或环状或非环状糖替代物中的类似位置来连接阳离子基团。阳离子基团可包括,例如质子化的氨基,其来源于,例如〇_AMINE(AMINE=NH2;烷氨基、二烷氨基、杂环基、芳氨基、二芳氨基、杂芳氨基或二杂芳氨基、乙二胺、聚氨基);氨基烷氧基,例如,〇(CH2)nAMINE、(例如,AMINE=NH2;烷氨基、二烷氨基、杂环基、芳氨基、二芳氨基、杂芳氨基或二杂芳氨基、乙二胺、聚氨基);氨基(例如册12;烷氨基、二烷氨基、杂环基、芳氨基、二芳氨基、杂芳氨基、二杂芳氨基或氨基酸);或NH(CH2CH2NH)nCH2CH2-AMINE(AMINE=NH2;烷氨基、二烷氨基、杂环基、芳氨基、二芳氨基、杂芳氨基或二杂芳氨基)。

化合物7018:通过与制备化合物7010中使用的类似的实验条件制备,使用DCM中的醇7017(1.42g,2.68mmol,1.Oeq)、N,N-二甲氨基丁酸盐酸盐(0·53g,3.21mmol,1.2eq)、DIPEA(1.48mL,8.Ommol,3.Oeq)、EDCI(0·56g,2.94mmol,1.leq)、DMAP(0·065g,0.53mmol,0.1eq),得到1.34g(78%)纯产物7018。虫NMR(400MHz,CDC13)δ5·47-5·20(πι,8H),4.92-4.77(m,lH),2.76(t,J=6.3,2H),2.28(dt,J=16.6,7.5,4H),2.20(s,6H),2.08-1.89(m,8H),1.83-1.70(m,2H),1.48(d,J=5.2,4H),1.38-1.16(m,40H),0·9卜0·80(m,6H)。13C匪R(101MHz,CDC13)δ173.61,130.51,130.40,130.35,130.13,130.05,128.16,128.13,77.55,77.23,76.91,74.46,59.18,45.68,34.36,32.84,32.69,32.13,31.75,29.99,29.92,29.89,29.78,29.76,29.72,29.67,29.58,29.54,29.52,29.40,29.36,27.45,27.43,25.84,25.57,23.39,22.91,22.80,14.36,14.31。C43HS1N02的分子量计算值643.6;实测值644.5。

免疫刺激性核酸包括脱氧核糖核酸和核糖核酸。在脱氧核糖核酸的情况下,已显示某些序列或基序在哺乳动物中引发(illicit)免疫刺激。此类序列或基序包括CpG基序、富含嘧啶的序列和回文序列。脱氧核糖核酸中的CpG基序据认为被内体受体toll样受体9(TLR-9)特异性识别,然后该受体触发先天性免疫和获得性免疫刺激途径。还报导了某些免疫刺激核糖核酸序列。此类RNA序列据认为通过结合toll-样受体6和7(TLR-6和TLR-7)来触发免疫激活。此外,也报导了双链RNA具有免疫刺激性并且据认为其通过与TLR-3结合而被活化。

将甲磺酸亚油醇酯(26.6g,77.2mmol)和溴化锂(30.5g,350mmol)在丙酮(350mL)中的混合物在氮气下搅拌两天。将所得悬液过滤,用丙酮洗涤固体。将滤液和洗涤液合并,蒸发溶剂。将所得残余物用水(300mL)处理。水相用乙醚(3X150mL)萃取。将合并的乙醚相用水(200mL)、盐水(200mL)洗涤,经无水Na2S04干燥。蒸发溶剂,得到29.8g黄色油。通过用己烷洗脱的硅胶柱层析法(230-400目,700mL)纯化粗产物。得到20.8g(82%)的二亚油基溴(II)。

在一个实施方案中,&或1?2中的至少一个包含至少一个双键和至少一个三键。

反义寡核苷酸

实施例9.寡核苷酸的合成

典型的应用包括使用公知的方法以提供siRNA的细胞内递送以敲低或沉默特定细胞靶。可选地,应用包括编码治疗上有用的多肽的DNA或mRNA序列的递送。以这种方式,通过供给缺少的或不存在的基因产物来为遗传疾病提供治疗(即,关于杜兴肌营养不良,参见Kunkel,等人,Brit.Med.Bull.45(3):630-643(1989),和关于囊性纤维化,参见Goodfellow,Nature341:102-103(1989))。本发明组合物的其它用途包括将反义寡核苷酸引入细胞(参见,Bennett等人,Mol.Pharm.41:1023-1033(1992))〇